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ＥＳ細胞研究のイニシャルトレーニング

無菌操作の基本

1-1    培養室の入退室
1-2    クリーンベンチ、インキュベータなどの使用規則
1-3    滅菌（オートクレーブ、乾熱、EOガス、エタノール）
1-4    ピペットの使用法
1-5    顕微鏡の使用法

血清の非働化と培地の調製方法、その他の準備

2-1    各試薬の保存場所
2-2    血清の非働化の意味と方法
2-3    繊維芽細胞の培地の調製
2-4    マウスＥＳ細胞の培地の調製
2-5    マウスＥＳ細胞用のトリプシン溶液の調製

マウス胎児繊維芽細胞やSTO細胞

3-1    マウス胎児繊維芽細胞の調製
3-2    マウス胎児繊維芽細胞の凍結保存
3-3    凍結保存細胞の融解方法
3-4    マウス胎児繊維芽細胞とSTO細胞の培養
3-5    繊維芽細胞（STO細胞）の継代のタイミングと方法

フィーダーの調製（マイトマイシンC処理）

4-1    マイトマイシンCの説明
4-2    マイトマイシンCの添加方法
4-3    フィーダー調製

マウスＥＳ細胞の培養（継代、観察）

5-1    ＥＳ細胞培養のプラン
5-2    凍結保存ＥＳ細胞の融解
5-3    ＥＳ細胞の培養と継代
5-4    ＥＳ細胞の凍結保存
5-5    ＥＳ細胞の形態的観察
5-6    ＥＳ細胞のリクローニング

マウスＥＳ細胞の核型検査

6-1    コルヒチン処理
6-2    細胞の固定
6-3    染色体の展開
6-4    写真撮影

マウスへの過排卵誘導

7-1    マウスの取り扱い方
7-2    過排卵誘導について
7-3    PMSとhCGの腹腔内投与
7-4    交配
7-5    膣栓（プラグ）の確認

胚の採取

8-1    初期胚の発生
8-2    初期胚の培養方法について
8-3    初期胚培養の培地などの準備
8-4    採胚用のピペット作製
8-5    マウスの頚椎脱臼
8-6    マウスの解剖
8-7    子宮と卵管の採取
8-8    子宮と卵管の培地灌流
8-9    胚の採取と胚の選別
8-10   胚の培養

細胞期胚とＥＳ細胞の凝集

9-1    凝集用ディッシュの作製
9-2    ８細胞期胚の透明帯除去
9-3    凝集用のＥＳ細胞のトリプシン処理
9-4    ８細胞期胚とＥＳ細胞の凝集と培養
9-5    胚盤胞の確認

胚盤胞の偽妊娠マウス子宮内への移植偽妊娠

10-1    精管結紮マウス
10-2    メスの発情確認と交配
10-3    プラグの確認
10-4    ネンブタールによる麻酔
10-5    胚盤胞の子宮への移植
10-6    妊娠の確認
10-7    出産の確認

ＥＳ細胞の多分化能の確認

11-1    キメラマウスの確認とキメラ率
11-2    キメラマウスの交配によるＥＳ細胞の生殖系列寄与の確認
11-3    ヌードマウス皮下皮下移植による三胚葉形成
11-4    胚葉体形成後の心筋細胞への分化

マウスＥＳ細胞の樹立

12-1    フィーダーの作製
12-2    マウス８細胞期胚の採取と培養
12-3    胚盤胞の透明帯除去
12-4    胚盤胞とフィーダーの接着後、培養
12-5    成長内部細胞塊の採取とトリプシン処理
12-6    コロニーの熟成
12-7    ライン化

マウスＥＳ細胞への外来遺伝子導入

13-1    エレクトロポレーション
13-2    薬剤による細胞の選別
13-3    薬剤耐性クローンのピックアップ
13-4    薬剤耐性クローンの増殖
13-5    ２４穴プレートでの凍結保存
13-6    染色体DNA調製のための細胞培養
13-7    ２４穴プレートからの染色体DNAの調製
13-8    凍結２４穴プレートの融解